GDF{0}}mg/buteliukas reikšmingai skatina raumenų masės ir jėgos padidėjimą

GDF-8 1mg/butelio šerdies įvadas

Miostatinas|Transformuojantis augimo faktorius{0}} Superšeimos narys 1mg/buteliukas

Bendrinis pavadinimas: miostatinas (augimo diferenciacijos faktorius-8)

Angliškas pavadinimas: miostatinas (augimo diferenciacijos faktorius 8, GDF-8)

Baltymų struktūra: Subrendę peptidai yra homodimerai, kurių kiekvienoje grandinėje yra maždaug 110 aminorūgščių.

Molekulinė masė: apie 25 kDa (monomero forma)

Grynumas: didesnis nei 90 % arba lygus jai (SDS-PAGE/HPLC)

Turinys: 1mg / buteliukas

Išvaizda: Balti liofilizuoti milteliai

Sandėliavimas: Užšaldykite -80 laipsnių temperatūroje, saugokite nuo šviesos ir laikykite sausoje vietoje.

Naudojimo ir saugojimo vadovas

GDF-8 (miostatinas):

GDF-8, transformuojančių augimo faktorių- superšeimos narys, daugiausia išreiškiamas skeleto raumenyse. Kaip neigiamas raumenų augimo reguliatorius, jis tiksliai kontroliuoja skeleto raumenų masę, prisijungdamas prie aktyvino receptorių IIB/ALK4/5 signalizacijos kelio, slopindamas mioblastų proliferaciją ir diferenciaciją. Kaip pagrindinis neigiamas grįžtamasis ryšys, signalizuojantis raumenų augimui, jis vaidina pagrindinį vaidmenį eksperimentiniuose raumenų vystymosi, regeneracijos, atrofijos (pvz., vėžio kacheksijos ir su amžiumi susijusi sarkopenija) ir medžiagų apykaitos ligų modeliuose. Palyginti su proanabolizmo veiksniais, jo neigiamos reguliavimo charakteristikos suteikia unikalią perspektyvą suprasti raumenų homeostazės pusiausvyros mechanizmus.

Dėl itin svarbaus neigiamo reguliavimo vaidmens auginant raumenis, GDF{2}}8 plačiai naudoja raumenų biologijos, regeneracinės medicinos, mankštos fiziologijos ir medžiagų apykaitos ligų tyrinėtojai. Palyginti su genų išmušimo modeliais, jo rekombinantinio baltymo forma yra standartizuota eksperimentinė priemonė, skirta tiksliai kontroliuoti slopinančių signalų intensyvumą, tirti dozės-atsako ir laiko procesus in vitro ir in vivo. Jo taikymas tiriant raumenų regeneracijos sutrikimus, raumenų atrofijos modelius ir medžiagų apykaitos tyrimus, susijusius su raumenų ir riebalų sąveika, yra pagrindas įvertinti galimas intervencijos strategijas, nukreiptas į GDF-8 kelią.

GDF-8 programos:

Kaip klasikinis neigiamas raumenų augimo reguliatorius, jis naudojamas in vitro ir in vivo modeliuose, siekiant tiksliai imituoti arba sustiprinti raumenų augimą slopinančius signalus, taip tiriant jo slopinamąjį poveikį mioblastų proliferacijai, diferenciacijai, skeleto raumenų masei ir funkcijai. Jis pirmiausia naudojamas raumenų atrofijos, sutrikusios raumenų regeneracijos ir raumenų bei kitų audinių (pvz., riebalų ir kaulų) sąveikos molekuliniams mechanizmams tirti.

Jis plačiai naudojamas raumenų atrofijos modeliuose, mioblastų / palydovinių ląstelių funkcijos tyrimuose, raumenų regeneracijos eksperimentuose ir raumenų apykaitos sutrikimų, susijusių su nutukimu ir diabetu, tyrimuose. Jo standartizuota rekombinantinio baltymo forma yra pagrindinė tyrimų priemonė, skirta įvertinti naujus vaistus nuo raumenų atrofijos, tirti pratimų adaptacijos molekulinį pagrindą ir terapines strategijas, nukreiptas į GDF-8 signalizaciją.

Naudojimo ir saugojimo būdai

1. Atskiedimas ir paruošimas:

Rekomenduojamas tirpiklis:

Pageidaujamas tirpiklis: Praskieskite acto rūgšties tirpalą pH 4,0-5,0 (pvz., 20 mM acto rūgšties).

Raktų laikiklis: Reikia pridėti baltymo nešiklioį tirpiklį ir visus skiediklius;rekomenduojamas sterilus acto rūgšties tirpalas, kuriame yra 0,1 % galvijų serumo albumino (BSA).

Darbinio tirpalo skiedimas: Atskieskite iki fiziologinio pH susterilus PBS arba ląstelių auginimo terpė, kurioje yra 0,1–1 % BSA.

Visiškai draudžiama: Griežtai draudžiama tiesiogiai ištirpinti ar skiesti baltymą grynu vandeniu, neutraliu PBS arba tirpalais be baltymų nešiklio,kitu atveju įvyks negrįžtamas baltymų agregacija, nusodinimas ir inaktyvacija.

Standartinė paruošimo procedūra:

Tirpiklio paruošimas:

Paruoškite 20 mM sterilų acto rūgšties tirpalą, kuriame yra 0,1 % BSA (arba didesnio grynumo baltymo nešiklio), ir filtruokite per 0,22 μm filtro membraną.

Prieš naudojant tirpiklį reikia atšaldyti-lede.

Atkūrimo procedūra:

Procedūrą atlikite ant ledo. Į 1 mg buteliuką įpilkite 1,0 ml iš anksto -atšaldyto rūgštinio nešiklio baltymo tirpiklio.

Mikropipete labai lėtai įpurkškite mėginį išilgai butelio sienelės, kad nesusidarytų oro burbuliukai ar tiesioginis poveikis užšaldomam{0}}džiūvui.

Padėkite buteliuką ant ledo iršvelniai pasukite jį horizontaliai 5-10 minučiųkol milteliai visiškai ištirps.Nemaišykite, nekratykite, nepūskite ir stipriai nemaišykite.

Galutinė koncentracija: 1 mg/mL (apie 40 μM) rūgštinis pradinis tirpalas.

Dozavimas ir gradientinis skiedimas:

Nedelsdami paskirstykite į vienkartines 2-10 μL dozes, naudodami mažai adsorbuojančius silanizuotus centrifugos mėgintuvėlius ant ledo.

Skiedžiant, pirmiausia praskieskite rūgštinį pradinį tirpalą bent 100 kartų PBS arba auginimo terpe, kurioje yra 0,1–1 % BSA, kad neutralizuotų pH. Pavyzdžiui, paimkite 1 μL pradinio tirpalo ir įpilkite į 99 μL PBS, kuriame yra 1 % BSA, kad gautumėte tarpinį 10 ug/ml tirpalą.

Tada tarpinis tirpalas praskiedžiamas iki galutinės darbinės koncentracijos. Visi praskiedimo etapai atliekami ant ledo.

Aiškiai paženklinta: GDF-8, koncentracija, pH, paruošimo data, partijos numeris, laikymo temperatūra.

Darbinės koncentracijos nuoroda:

In vitro ląstelių eksperimentai: dažniausiai naudojamas koncentracijos diapazonas yra nuo 0,1 iki 5 ug/mL (maždaug nuo 4 iki 200 nM), kurį reikia optimizuoti atsižvelgiant į ląstelės tipą ir eksperimentinį tikslą.

In vivo eksperimentai su gyvūnais: Dozavimas turi būti griežtai nustatytas pagal modelį ir vartojimo būdą (pvz., į pilvaplėvės ertmę, į raumenis, į veną), remiantis literatūra. Dažniausiai naudojamas diapazonas yra nuo ug/kg iki mg/kg irturi būti atlikti preliminarūs eksperimentai.

Skaičiavimo pavyzdys: Norėdami paruošti 100 ng/mL darbinį tirpalą, paimkite 1 μL 10 ug/mL tarpinio tirpalo ir įpilkite į 100 μL auginimo terpės.

Pagrindiniai punktai, į kuriuos reikia atkreipti dėmesį:

Žema temperatūra ir švelnumas: Visas procesas turi būti atliekamas ant ledo, o judesiai turi būti itin švelnūsužkirsti kelią baltymų denatūravimui.

Priverstinis rūgšties tirpinimas: Jis turi būti ištirpintas rūgštiniame buferiniame tirpale (pH 4-5)., kuris yra labai svarbus norint išlaikyti jo tirpumą ir aktyvumą.

Priverstiniai nešikliai: Tirpinimas ir skiedimas turi būti atliekami naudojant tirpalus, kuriuose yra baltymų nešiklio, pvz., BSAkad būtų išvengta adsorbcijos ir agregacijos.

Užšaldymo{0}}atšildymo ciklas griežtai draudžiamas: Pakartotiniai užšaldymo{0}}atšildymo ciklai yra griežtai draudžiami; tirpalas turi būti išpilstytas vienu ypu. Praskiestas darbinis tirpalasnegalima laikyti; jis turi būti paruoštas ir naudojamas nedelsiant.

Būklės stebėjimas: Ištirpinus tirpalas turi būti skaidrus ir šiek tiek opalinis. Bet kokių flokuliuojančių medžiagų, dalelių ar drumstumo buvimas rodo, kad baltymas denatūravosi ir agregavosi, todėl tirpalą reikia išmesti.

2. Laikymo sąlygos:

Neretirpinti liofilizuoti milteliai:

Tik saugojimas: -80 laipsnių (gilus užšalimas). Nelaikykite -20 laipsnių temperatūroje.

Galiojimo laikas: 12 mėnesių esant -80 laipsnių.

Griežtai saugoti nuo šviesos: laikykite originaliame šviesai{0}}atspariame aliuminio folijos maišelyje su sausikliu.

Paruoštas tirpalas:

Iš karto išduodama:Dozavimasturi būti baigtas per 5 minutespo ištirpinimo.

Perpakuota ir užšaldyta: Galima laikyti tik -80 laipsnių temperatūroje, maksimalus tinkamumo laikas 2 savaitės, nerekomenduojama laikyti.

Laikyti griežtai draudžiama: Praskiestas darbinis tirpalas turinegali būti saugomiir turi būti laikomas ant ledo ir sunaudotas per 4 valandas.

Transporto sąlygos:

Jis turi būti transportuojamaspagalsausas ledas(-78 laipsnių) sąlygomis.

Pakuotėje turi būti pakankamai sauso ledo ir izoliacijos, kad ji neattirptų viso proceso metu.

3. Stabilumo ir apdorojimo standartai:

Fizikinis ir cheminis stabilumas:

Jis jautrus pH iryra stabilus ir tirpus tik esant rūgštiniam pH (4,0-5,0). Jis lengvai kaupiasi ir nusėda esant neutraliam ir šarminiam pH.

Jis itin jautrus šiluminiam ir mechaniniam įtempimui (sūkuriui, virpesiams, burbuliavimui) ir pasikartojantiems užšalimo{0}}atšildymo ciklams.

Jis jautrus paviršiaus adsorbcijai, todėl turi būti naudojamas baltymas-nešiklis ir mažos{0}}adsorbcijos talpykla.

Biologinio aktyvumo palaikymas:

keturi principai: "rūgštinis tirpinimas, nešiklio apsauga, švelnumas žemoje{0}}temperatūroje ir griežtas užšalimo-atšildymo ciklų draudimas.

Reikianieko, susisiekitemus

Populiarus Žymos: gdf{0}}mg/buteliukas žymiai skatina raumenų masės ir jėgos didinimą, Kinija gdf-8 1mg/buteliukas labai skatina raumenų masės ir jėgos didinimo gamintojus, tiekėjus, gamyklą